在碱性环境中,蛋白质和Cu2+离子结合并将其还原成Cu1+离子。BCA与Cu1+离子结合形成稳定的紫蓝色复合物,在562 nm处有最大光吸收并与蛋白质浓度成线性关系,据此可测定蛋白质的浓度。与Lowery法相比,BCA法最大的优点是不受去垢剂的影响。若样品中存在还原剂,同样可以将Cu2+离子还原成Cu1+离子,从而提高光吸收值。本试剂盒中的试剂C可以有效地降低蛋白质抽提样品中残留的还原剂对蛋白质浓度检测的干扰。样品中DTT浓度≤5 mM或β-巯基乙醇浓度≤10 mM时,蛋白质浓度的测定不会受影响。
溶液A; 溶液B; 试剂C; 溶液D; BSA标准蛋白(2 mg/ml)
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