概述

双链DNA补平和连接试剂盒是利用大肠杆菌DNA多聚酶I的Klenow片段多聚酶活性能够补平不互补的5’端突出为基础。对于用2个不同限制性内切酶酶切所获得的片段，可以选择性补平一端。再通过T4 DNA连接酶对平末端DNA进行有效连接，此试剂盒操作简便，全过程可在1 h内完成。 在连接缓冲液中加入PEG提高平末端DNA的连接效率。连接过程中载体DNA可自环化，片段会连成寡聚体。优化插入片段和载体末端浓度和比率有利于提高正确连接产物的产率。

特点

• 操作简便，全过程可在1 h内完成。
• 在连接缓冲液中加入PEG提高平末端DNA的连接速率。

应用

连接、转化

组份

Klenow DNA Polymerase, 3 U/μl;10 × Klenow Reaction Buffer;0.5 mM dNTP Mix;T4 DNA Ligase, 2 U/μl;10 × Ligation Buffer;50% PEG 4000;Sterilized ddH2O;操作手册