RNase H Minus M-MuLV Reverse Transcriptase (RT) 是一种遗传修饰的M-MuLV RT,其与M-MuLV RT结构和催化特性不同。该酶具有RNA和DNA依赖的聚合酶活性,但是却没有RNase H活性(该活性区域点突变)。该酶不能降解第一链cDNA合成时形成RNA-DNA 复合物中的RNA,因此可获得全长的cDNA。RNase H Minus M-MuLV Reverse Transcriptase 在宽的温度范围(42~55°C)内有酶活性,因此适合逆转录具有较多二级结构的RNA分子。
第一链cDNA合成,用于RT-PCR和实时RT-PCR 可提高反应温度,降低二级结构对逆转录的影响 合成cDNA用于克隆和表达研究 制备芯片用于标记的cDNA探针,可用于杂交试验,如microarray杂交 DNA标记 引物延伸法分析RNA
在37°C、10 min内将1 nmol dTMP合成掺入多聚的核苷酸片段(吸附在DE-81上)所需的酶量定义为1个活力单位(U)
保存缓冲液 | 50 mM Tris-HCl (pH7.5),0.1 M NaCl,1 mM EDTA,5 mM DTT,0.1%(v/v)Triton X-100 和50%(v/v)甘油 |
5 x AMV RT缓冲液 | 250 mM Tris-HCl (pH8.3,25°C),250 mM KCl,20 mM MgCl2,50 mM DTT |
抑制剂 | 金属螯合剂、无机磷酸盐、焦磷酸和多胺 |
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